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關于原代細胞培養時的問題解答
發布時間:2022-08-25   點擊次數:167次
  原代細胞培養也叫初代培養,是建立細胞系的步,其步驟包括取材→分離→培養和維持。
 
  那么關于原代細胞培養時有哪些問題呢?下面就為大家來一一解答。
 
  1、原代細胞與細胞系有什么區別?
 
  根據傳統定義,自組織次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞直接從組織分離,生命周期有限,經數次傳代后會逐漸停止生長。原代細胞在有限的生命周期內需掌握好細胞的生長空間,以保持細胞群中基因型和表型的一致性。
 
  細胞系是不斷生長、分化的細胞群,因其經過遺傳改造,致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫療或科研。
 
  但實際上,經過長時間、連續的傳代培養后,細胞系隨著代數的增加,細胞的基因型和表型都有可能發生改變。
 
  需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群,除非細胞經過了遺傳改造。
 
  2、倍增和代數有什么區別?
 
  倍增是培養物中細胞總數的翻倍,通常是指細胞指數或對數生長期。代數是指細胞群從培養瓶中移出,傳代培養過程的次數,傳代培養的目的,是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。
 
  3、接收到的凍存細胞該如何處理?
 
  收到包裝箱后,立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快,以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃,這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。
 
  4、凍存的細胞該如何開始培養?
 
  (1) 將一管細胞從液氮罐中取出,注意保護手和眼睛。
 
  (2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉,直到管內物體*融化。
 
  (3) 將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉入無菌環境。
 
  (4) 用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。
 
  (5) 打開蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負壓,開蓋時可能會有少量溢出,這是正?,F象)。
 
  (6) 用多聚賴氨酸(或參照說明書)包被培養瓶。多數細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞。
 
  (7) 蓋好培養瓶的蓋子,輕輕搖晃培養瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。
 
  (8) 將培養瓶放入培養箱中(37℃,5%CO2,95%空氣)
 
  (9) 放入培養箱后第6-16小時更換一次培養基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。
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